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| 名稱 | pU6-PIK3R4(human)-sgRNA2-Cas9-EGFP-Puro |
| 別稱 | gattacttaaaacagcagcg |
| 質(zhì)粒宿主 | 哺乳細(xì)胞 |
| 質(zhì)粒用途 | 基因編輯 |
| 片段類型 | CRISPR |
| 片段物種 | 人 |
| 原核抗性 | Amp |
| 篩選標(biāo)記 | Puro |
| 熒光標(biāo)記 | 綠色 |
| 啟動(dòng)子 | U6 |
| 復(fù)制子 | pUC |
| 感受態(tài) | Stbl3 |
| 溫度 | 37度 |
| 背景載體 | pU6-MCS-sgRNA-Cas9-EGFP-Puro |
| 正向引物 | U6-F |
注意事項(xiàng)：轉(zhuǎn)化前請(qǐng)準(zhǔn)確查找該質(zhì)粒相應(yīng)的抗生素名稱、抗生素使用濃度、感受態(tài)名稱和培養(yǎng)溫度。
1、收到質(zhì)粒干粉后請(qǐng)先5000rpm離心1min，再加入20μl~50μl無菌水或 pH8.0 的 1*TE緩沖液來溶解質(zhì)粒，室溫放置1min；
2、從-80℃冰箱中取出相應(yīng)的感受態(tài)，置于冰盒上解凍，并做好標(biāo)記；
3、取2μl質(zhì)粒加至100μl感受態(tài)中，冰浴30min；
4、42℃熱激90s，再冰浴2min；
5、加入900μl無抗的LB液體培養(yǎng)基，180rpm震蕩培養(yǎng)45min；
6、6000rpm離心5min，僅留100ul上清混勻菌體沉淀；
7、混勻后的菌液加至對(duì)應(yīng)抗性的LB平板上，倒入適量玻璃珠，涂勻液體；
8、將平板正向培養(yǎng)1h，再倒置培養(yǎng)12h~16h；
9、挑取單克隆菌落至對(duì)應(yīng)抗性的LB液體培養(yǎng)基中，震蕩培養(yǎng)12h~16h，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要提取質(zhì)粒
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