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| 名稱 | pTLCV2-U6-NNMT(human)-sgRNA4-Cas9-EGFP-EF1a-Puro |
| 質粒宿主 | 哺乳細胞 |
| 質粒用途 | 基因編輯 |
| 片段類型 | CRISPR |
| 片段物種 | 人 |
| 原核抗性 | Amp |
| 篩選標記 | Puro |
| 熒光標記 | 綠色 |
| 啟動子 | U6 |
| 復制子 | pUC |
| 感受態 | DH5a |
| 溫度 | 37度 |
| 背景載體 | TLCV2 |
| 正向引物 | U6-F |
注意事項：轉化前請準確查找該質粒相應的抗生素名稱、抗生素使用濃度、感受態名稱和培養溫度。
1、收到質粒干粉后請先5000rpm離心1min，再加入20μl~50μl無菌水或 pH8.0 的 1*TE緩沖液來溶解質粒，室溫放置1min；
2、從-80℃冰箱中取出相應的感受態，置于冰盒上解凍，并做好標記；
3、取2μl質粒加至100μl感受態中，冰浴30min；
4、42℃熱激90s，再冰浴2min；
5、加入900μl無抗的LB液體培養基，180rpm震蕩培養45min；
6、6000rpm離心5min，僅留100ul上清混勻菌體沉淀；
7、混勻后的菌液加至對應抗性的LB平板上，倒入適量玻璃珠，涂勻液體；
8、將平板正向培養1h，再倒置培養12h~16h；
9、挑取單克隆菌落至對應抗性的LB液體培養基中，震蕩培養12h~16h，根據實驗需要提取質粒
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