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一、載體構(gòu)建的基本實驗步驟
(1)目的DNA片段和載體的制備；
(2)目的DNA片段和載體的連接；
(3)連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化；
(4)克隆篩選。
(5)測序驗證及結(jié)果交付
二、詳細(xì)內(nèi)容
1、以PCR擴增為基礎(chǔ)的各類載體構(gòu)建，如大腸桿菌表達(dá)載體、酵母表達(dá)載體、桿狀病毒表達(dá)載體、哺乳動物表達(dá)載體；報告基因載體等；
2、基因定點突變，包括單點突變，多點突變，基因缺失等；
3、載體元件替換和改造；
4、siRNA載體和miRNA表達(dá)載體構(gòu)建；
5、過表達(dá)載體構(gòu)建。
| pLVX-CENPNshRNA2-EGFP(2A)Puro基因編輯質(zhì)粒 |
| pLVX-CD38-IRES-ZsGreen1蛋白表達(dá)質(zhì)粒 |
| pLVX-WTAPshRNA2-EGFP(2A)Puro基因編輯質(zhì)粒 |
| pLVX-WTAPshRNA3-EGFP(2A)Puro基因編輯質(zhì)粒 |
| pLVX-CLDN14shRNA1-EGFP(2A)Puro基因編輯質(zhì)粒 |
| pLVshRNA-EGFP(2A)Puro-LDLRAD3-shRNA1基因編輯質(zhì)粒 |
| pET28b-gag-pol蛋白表達(dá)質(zhì)粒 |
| pLVX-TetOne-P210蛋白表達(dá),誘導(dǎo)質(zhì)粒 |
| pLenti-ABERA-P2A-Puro蛋白表達(dá)質(zhì)粒 |
| pLenti-FNLS-P2A-Puro蛋白表達(dá)質(zhì)粒 |
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