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注意事項:轉化前請準確查找該質粒相應的抗生素名稱、抗生素使用濃度、感受態(tài)名稱和培養(yǎng)溫度。
1、收到質粒干粉后請先5000rpm離心1min,再加入20μl~50μl無菌水或 pH8.0 的 1*TE緩沖液來溶解質粒,室溫放置1min;
2、從-80℃冰箱中取出相應的感受態(tài),置于冰盒上解凍,并做好標記;
3、取2μl質粒加至100μl感受態(tài)中,冰浴30min;
4、42℃熱激90s,再冰浴2min;
5、加入900μl無抗的LB液體培養(yǎng)基,180rpm震蕩培養(yǎng)45min;
6、6000rpm離心5min,僅留100ul上清混勻菌體沉淀;
7、混勻后的菌液加至對應抗性的LB平板上,倒入適量玻璃珠,涂勻液體;
8、將平板正向培養(yǎng)1h,再倒置培養(yǎng)12h~16h;
9、挑取單克隆菌落至對應抗性的LB液體培養(yǎng)基中,震蕩培養(yǎng)12h~16h,根據(jù)實驗需要提取質粒
| pCAG-VSVN輔助包裝質粒 |
| pLKO.1-shYAP1#1-Puro基因沉默質粒 |
| Tet-pLKO-Puro基因沉默,誘導質粒 |
| pLKO-p53-shRNA-941基因沉默質粒 |
| pLKO-p53-shRNA-427基因沉默質粒 |
| pLentiCRISPRV2-PTHLH(human)-sgRNA2基因編輯質粒 |
| pBABE-CDK4(human)-P2A-CCND1(human)-SV40-Puro蛋白表達質粒 |
| pLVshRNA-U6-CCNDBP1(human)-shRNA1-PGK-EGFP(2A)Puro基因沉默質粒 |
| pLVshRNA-U6-IQGAP1(mouse)-shRNA3-PGK-EGFP-E2A-Puro基因沉默質粒 |
| pLVshRNA-U6-RAB11FIP2(mouse)-shRNA2-PGK-EGFP-E2A-Puro基因沉默質粒 |

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