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一、載體構(gòu)建的基本實驗步驟
(1)目的DNA片段和載體的制備；
(2)目的DNA片段和載體的連接；
(3)連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化；
(4)克隆篩選。
(5)測序驗證及結(jié)果交付
二、詳細(xì)內(nèi)容
1、以PCR擴增為基礎(chǔ)的各類載體構(gòu)建，如大腸桿菌表達(dá)載體、酵母表達(dá)載體、桿狀病毒表達(dá)載體、哺乳動物表達(dá)載體；報告基因載體等；
2、基因定點突變，包括單點突變，多點突變，基因缺失等；
3、載體元件替換和改造；
4、siRNA載體和miRNA表達(dá)載體構(gòu)建；
5、過表達(dá)載體構(gòu)建。
| pLKO.1-Puro基因沉默質(zhì)粒 |
| pLKO.1-TRC-SP6基因沉默質(zhì)粒 |
| pLKO.1基因沉默質(zhì)粒 |
| pLKO.1-EGFP基因沉默質(zhì)粒 |
| pLEX-MCS蛋白表達(dá)質(zhì)粒 |
| pLEGFP-N1蛋白表達(dá)質(zhì)粒 |
| pCDF1-MCS2-EF1-Puro蛋白表達(dá)質(zhì)粒 |
| pCDH-ECMV-MCS-3×FLAG-EF1α-ZsGreen1-T2A-Puro蛋白表達(dá)質(zhì)粒 |
| pCDH-MSCV-MCS-EF1a-CopGFP-T2A-Puro蛋白表達(dá)質(zhì)粒 |
| pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP蛋白表達(dá)質(zhì)粒 |
| pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro蛋白表達(dá)質(zhì)粒 |
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