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一、載體構(gòu)建的基本實(shí)驗(yàn)步驟
(1)目的DNA片段和載體的制備；
(2)目的DNA片段和載體的連接；
(3)連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化；
(4)克隆篩選。
(5)測(cè)序驗(yàn)證及結(jié)果交付
二、詳細(xì)內(nèi)容
1、以PCR擴(kuò)增為基礎(chǔ)的各類(lèi)載體構(gòu)建，如大腸桿菌表達(dá)載體、酵母表達(dá)載體、桿狀病毒表達(dá)載體、哺乳動(dòng)物表達(dá)載體；報(bào)告基因載體等；
2、基因定點(diǎn)突變，包括單點(diǎn)突變，多點(diǎn)突變，基因缺失等；
3、載體元件替換和改造；
4、siRNA載體和miRNA表達(dá)載體構(gòu)建；
5、過(guò)表達(dá)載體構(gòu)建。
| Tet-pLKO-Puro-PMP22-shRNA1基因沉默,誘導(dǎo)質(zhì)粒 |
| pTrcHis2A蛋白表達(dá)質(zhì)粒 |
| pHY-P43蛋白表達(dá)質(zhì)粒 |
| pMA0911蛋白表達(dá),分泌質(zhì)粒 |
| pBE2R蛋白表達(dá),分泌質(zhì)粒 |
| pBE980a蛋白表達(dá),分泌質(zhì)粒 |
| pHP13-P43蛋白表達(dá)質(zhì)粒 |
| pPIC9K-His蛋白表達(dá)質(zhì)粒 |
| pYD1蛋白表達(dá),分泌質(zhì)粒 |
| pYX212蛋白表達(dá)質(zhì)粒 |
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