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        影響穩轉細胞株建立的主要因素是什么?

        更新時間:2022-03-01      瀏覽次數:644
          穩轉細胞株是指持續穩定地在細胞中表達特定基因,或抑制特定基因的表達。 穩定細胞株的目的將基因質粒DNA整合到細胞染色體上,細胞長期穩定表達該基因。 在基因功能的研究中,基因是否有效轉染靶細胞是功能研究的前提條件之一。 另一方面,穩定表達細胞株彌補了外源基因在一些瞬時感染(或轉染)的功能實驗中表達時間短的缺點,便于長期觀察基因對細胞功能的影響和蛋白之間的相互作用。
          穩轉細胞株建立的時間:
          需要長期在目的細胞中研究基因功能,建立穩定的周轉細胞系可以降低頻繁轉染和病毒包裝的成本,便于實驗研究
          部分蛋白質半衰期極長,瞬時RNA只能干擾表達,不能清除已經表達的目的蛋白。 建立穩定細胞系可以達到更好的基因干預效果;
          瞬轉會引入*拷貝數的表達,人為因素導致實驗結果不準確,建立穩定旋轉細胞系有助于篩選拷貝數適量的細胞進行實驗研究
          需要誘導表達系統主要是在需要一些致死基因或時空表達的情況下;
          需要用細胞進行動物實驗的,如裸鼠腫瘤形成等,往往需要建立穩定旋轉細胞系。
          影響穩轉細胞株建立的主要因素是什么?
          整合位點轉錄活性:決定外源基因片段在穩定株中的表達質量;
          外源基因整合率:決定穩定株篩選的難易程度;
          插入外源基因片段的拷貝數:通常低拷貝或單拷貝可以減少人為干擾;
          外源基因片段整合到細胞后的穩定性:不同整合位點決定了染色體中外源片段的穩定性,部分區域容易發生重組和丟失,穩定株篩選后出現丟失現象。

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